天然产物合成生物学关键技术(2)
1.1 基于限制性内切酶的方法
1.1.1 依赖于同尾酶的BioBrick/BglBrick 同尾酶(如BglⅡ和BamHⅠ，XbaⅠ和SpeⅠ等)是一类识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能产生相同黏性末端的限制性内切酶[13]。Biobrick是首个实现标准生物元件(如启动子、核糖体结合位点、开放阅读框、编码序列和终止子等)顺序组装的DNA组装方法[14]。该法运用限制酶切和连接不仅能完成标准生物元件的平台构建，由于元件之间兼容，也能对形成的元件重新装配，组装成大型DNA片段。每个DNA元件上游与EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点相邻，下游与SpeⅠ和PstⅠ酶切位点相邻。同尾酶XbaⅠ和SpeⅠ识别不同的酶切位点，产生相同的黏性末端，一旦2个DNA元件连接，元件之间产生疤痕序列(ACTAGA)，原来的酶切位点将不复存在，也就不能被原有的限制酶所识别，所以连接产物用XbaⅠ或SpeⅠ酶切均不能将其消化[15]。需要注意的是元件与质粒骨架上不能有同尾酶酶切位点。Biobrick连接后的疤痕序列(ACTAGA)翻译后为苏氨酸精氨酸，不会产生移框突变和提前终止，可用于融合蛋白的表达 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4526 字符。
1.1.1 依赖于同尾酶的BioBrick/BglBrick 同尾酶(如BglⅡ和BamHⅠ，XbaⅠ和SpeⅠ等)是一类识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能产生相同黏性末端的限制性内切酶[13]。Biobrick是首个实现标准生物元件(如启动子、核糖体结合位点、开放阅读框、编码序列和终止子等)顺序组装的DNA组装方法[14]。该法运用限制酶切和连接不仅能完成标准生物元件的平台构建，由于元件之间兼容，也能对形成的元件重新装配，组装成大型DNA片段。每个DNA元件上游与EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点相邻，下游与SpeⅠ和PstⅠ酶切位点相邻。同尾酶XbaⅠ和SpeⅠ识别不同的酶切位点，产生相同的黏性末端，一旦2个DNA元件连接，元件之间产生疤痕序列(ACTAGA)，原来的酶切位点将不复存在，也就不能被原有的限制酶所识别，所以连接产物用XbaⅠ或SpeⅠ酶切均不能将其消化[15]。需要注意的是元件与质粒骨架上不能有同尾酶酶切位点。Biobrick连接后的疤痕序列(ACTAGA)翻译后为苏氨酸精氨酸，不会产生移框突变和提前终止，可用于融合蛋白的表达 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4526 字符。